病毒載體在核酸遞送領(lǐng)域已有較長(zhǎng)歷史，主要有重組腺相關(guān)病毒（rAAV）和慢病毒類(lèi)的病毒產(chǎn)品。脂質(zhì)納米顆粒(Lipid Nanoparticles，LNPs) 主要由可電離陽(yáng)離子脂質(zhì)、膽固醇、中性輔助磷脂和聚乙二醇修飾的磷脂（PEG-脂質(zhì)）組成，是目前遞送 mRNA 最主流的非病毒載體之一。由于其固有的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性，在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和過(guò)程控制期間，核酸遞送載體的設(shè)計(jì)、表征和質(zhì)量控制都需要有效的分析工具。

差示掃描量熱法（Differential Scanning Calorimetry, DSC）是在程序控制溫度下，測(cè)量樣品池與參考池之間的功率差與溫度的關(guān)系。MicroCal PEAQ-DSC 微量熱儀是表征蛋白質(zhì)等生物分子熱穩(wěn)定性的強(qiáng)有力的工具，主要用于生物制藥研發(fā)和生產(chǎn)。

MicroCal PEAQ-DSC 系統(tǒng)易于使用，無(wú)需標(biāo)記或固定，既可用于常規(guī)穩(wěn)定性研究，生物相似性和批次間一致性評(píng)價(jià)以及純化和生產(chǎn)條件的優(yōu)化，在核酸遞送載體的生物物理表征中也有很好的表現(xiàn)。

MicroCal PEAQ-DSC表征

mRNA-LNP樣品的熱轉(zhuǎn)變可逆性和重復(fù)性

MicroCal PEAQ-DSC用于分析 mRNA-LNP 以及游離的 mRNA 樣品。使用專(zhuān)用的PEAQ-DSC分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)樣本的 DSC 熱力學(xué)圖譜進(jìn)行基線校正后，計(jì)算熱轉(zhuǎn)變溫度 Tm 值和熱力學(xué)焓變?chǔ)。

借助 DSC 可以更好地了解 mRNA 和 LNP 的熱力學(xué)轉(zhuǎn)變。

典型的 mRNA 具有與莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)展開(kāi)相關(guān)的熱轉(zhuǎn)變，DSC 能夠檢測(cè)出這些不同的峰。如左下圖所示，在不同 pH值下，mRNA-LNP 表現(xiàn)出許多不同且又重疊的熱轉(zhuǎn)變，表觀焓也有明顯差異。DSC能夠分離多個(gè)不同的熱轉(zhuǎn)變峰，而右下圖的圓二色光譜（Circular dichroism, CD）不夠敏感，無(wú)法識(shí)別。

通過(guò)在每次DSC掃描樣品后進(jìn)行重新掃描，對(duì)樣品進(jìn)行熱轉(zhuǎn)變的可逆性測(cè)試。下圖顯示了第一次掃描和重新掃描后的 mRNA-LNP1 和游離 mRNA 樣品的 DSC 圖譜。結(jié)果表明 mRNA-LNP1 樣品的熱轉(zhuǎn)變峰是不可逆的，在重新掃描時(shí)并不會(huì)重現(xiàn)。相反，游離 mRNA 樣品在 65℃ 的熱轉(zhuǎn)變峰顯示出約 40% 的可逆性。

下圖為兩種 LNP配方不同的 mRNA-LNP1和 mRNA-LNP2 的 DSC 熱力學(xué)圖譜，均展示了良好的可重復(fù)性。

MicroCal PEAQ-DSC表征

rAAV5樣品的熱穩(wěn)定性

MicroCal PEAQ-DSC用于分析空的和載有核酸的 rAAV5 樣品的熱穩(wěn)定性，如下圖所示，他們對(duì)熱應(yīng)力表現(xiàn)出不同的響應(yīng)?？盏?rAAV5 樣品似乎更容易發(fā)生熱不穩(wěn)定，并且可以觀察到在主熱轉(zhuǎn)變溫度前的預(yù)過(guò)渡峰。而在載有核酸的 rAAV 樣品的 DSC 圖譜中，可以在 94.7℃ 左右檢測(cè)到一個(gè)額外熱轉(zhuǎn)變峰，這種額外的較高溫度轉(zhuǎn)變與 rAAV5 的血清型特異性 Tm 值明顯不同，可歸因于 rAAV5 衣殼崩解后釋放的核酸分子的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變。